WHO标准品78/556黄体生成素,垂体,β亚基LH原料的制备G.Hennen和R.M Lequin博士及其同事采用Closset等人(2)的方法为世界卫生组织制备了约20mg LH-β(批号NM14 DEAE I,G75(A+E))。来自LH批次NM14(Loeber(3))。利用氨基酸分析、色谱法和免疫测定法对该亚基制剂进行了表征;在对LHα特异性的两种不同免疫测定系统中发现其与人垂体LH的α亚基(LHα)的污染<0.1%(w/w)。Loeber(3)通过卵巢抗坏血酸消耗测定法(4)发现LH(批次NM14)的LH效价为8400(6630-11100)IU/mg,通过精囊增重测定法(5)发现LH的LH效价(具有95%置信限)为2360(1560-3210)IU/mmg,每一个都根据用于生物测定的人类垂体促性腺激素(FSH和LH)的第一个IRP(编码69/014)(6,7)。(参见Storring等人(8),将这些生物效力与其他高度纯化的人垂体LH制剂的生物效力进行比较)。
WHO标准品78/556黄体生成素,垂体,β亚基LH分配到安瓿中。1978年5月,将6.0mg LHβ制剂溶于含有0.5%(w/v)乳糖和0.1%(w/v。将等体积(0.5ml)的该溶液分配到安瓿中,并按照Campbell(9)和世界卫生组织生物标准化专家委员会(10)的描述,将安瓿内容物冷冻干燥、二次干燥并在氮气下密封。这批包括500支安瓿。11支称重安瓿中填充溶液的平均重量为0.503mg,其范围为平均值的0.14%。
污染活性根据编码69/014的IRP,通过卵巢抗坏血酸盐缺失分析,安瓿内容物的LH活性(具有95%置信限)估计为<0.5 IU/安瓿,根据用于生物测定的人类垂体FSH和LH的第二IRP,体外生物测定(11)估计为0.124 IU/安瓿(7,12)。假设高纯度LH的效力为10000 IU/mg(8),这些活性将代表天然LH最多0.2%(w/w)的污染。在特定的免疫测定系统中,安瓿LHβ制剂与FSH的交叉反应为:0.005-0.02%(w/w);<0.004%(w/w)的TSH;<0.08%(w/w)的LHα;在一个测定系统中LH为6.8-27.2%(w/w),在另一个测定体系中为11.2%(w/w。
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