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使用说明和预期用途
ERM-AD624 LISTERIA MONOCYTOGENES DNA AGAROSE PLUG该材料用于质量控制和/或方法性能评估。与任何参考材料一样,它可以用于建立控制图或验证研究。
请注意,该材料的认证值是使用李斯特菌PFGE方案获得的,如下所述。ERM-AD624 LISTERIA MONOCYTOGENES DNA AGAROSE PLUG遵循不同的PFGE协议可能会产生不同的频带模式,从而产生不同的结果。限制性培养前-将塞子放入100μL 1 x浓缩限制性内切酶(RE)缓冲溶液中,在37±1°C的干浴中培养10分钟。琼脂糖塞的消化-吸取RE缓冲液,加入100μL RE缓冲液(含5个单位的AscI酶),确保塞子完全浸入。
-将试管在37±1°C的干浴中培养4小时。消化片段的PFGE-将0.5 x TBE缓冲溶液(44.5 mM三硼酸酯;1 mM EDTA,pH 8.3)倒入电泳室,打开蠕动泵并将冷却器设置为14°C。-在0.5 x TBE中制备1%(w/v)Seakem金琼脂糖(SKG)琼脂糖,并在50ºC下保持直至使用。
-吸取酶溶液,向试管中加入200μL 0.5 x TBE,并在室温下孵育样品5分钟。
-将梳子放在工作台顶部,并将塞子装在梳齿底部。
-将塞子在梳子上干燥3分钟,并用1%(w/v)SKG琼脂糖溶液滴密封。
-将梳子放在凝胶托盘中,确保塞子的下边缘与框架正确对齐。
-小心地将琼脂糖溶液倒入凝胶托盘中,并使凝胶固化30分钟。
-取下梳子,用1%(w/v)SKG琼脂糖溶液填充孔,并使其固化。
-使用以下电泳设置:
初始切换时间:4 s
最终切换时间:40s
梯度:6 V/cm
角度:120º
迁移时间:14 x 13 cm(15孔)凝胶20小时21 x 14 cm(30孔)凝胶21小时
-在搅拌(150rpm)下,将凝胶在含有3倍浓缩GelRed的400mL超纯水中染色30分钟。
-使用紫外线橙色滤光片在紫外线源上拍摄凝胶。
-使用GeneTools(Syngene)或BioNumerics(Applied Maths-Biomérieux)等软件处理凝胶图像,以划定泳道和检测条带。