使用说明和预期用途
ERM-AD624 LISTERIA MONOCYTOGENES DNA AGAROSE PLUG该材料用于质量控制和/或方法性能评估。与任何参考材料一样，它可以用于建立控制图或验证研究。
请注意，该材料的认证值是使用李斯特菌PFGE方案获得的，如下所述。ERM-AD624 LISTERIA MONOCYTOGENES DNA AGAROSE PLUG遵循不同的PFGE协议可能会产生不同的频带模式，从而产生不同的结果。限制性培养前-将塞子放入100μL 1 x浓缩限制性内切酶（RE）缓冲溶液中，在37±1°C的干浴中培养10分钟。琼脂糖塞的消化-吸取RE缓冲液，加入100μL RE缓冲液（含5个单位的AscI酶），确保塞子完全浸入。
-将试管在37±1°C的干浴中培养4小时。消化片段的PFGE-将0.5 x TBE缓冲溶液（44.5 mM三硼酸酯；1 mM EDTA，pH 8.3）倒入电泳室，打开蠕动泵并将冷却器设置为14°C。-在0.5 x TBE中制备1%（w/v）Seakem金琼脂糖（SKG）琼脂糖，并在50ºC下保持直至使用。
-吸取酶溶液，向试管中加入200μL 0.5 x TBE，并在室温下孵育样品5分钟。
-将梳子放在工作台顶部，并将塞子装在梳齿底部。
-将塞子在梳子上干燥3分钟，并用1%（w/v）SKG琼脂糖溶液滴密封。
-将梳子放在凝胶托盘中，确保塞子的下边缘与框架正确对齐。
-小心地将琼脂糖溶液倒入凝胶托盘中，并使凝胶固化30分钟。
-取下梳子，用1%（w/v）SKG琼脂糖溶液填充孔，并使其固化。
-使用以下电泳设置：
初始切换时间：4 s
最终切换时间：40s
梯度：6 V/cm
角度：120º
迁移时间：14 x 13 cm（15孔）凝胶20小时21 x 14 cm（30孔）凝胶21小时
-在搅拌（150rpm）下，将凝胶在含有3倍浓缩GelRed的400mL超纯水中染色30分钟。
-使用紫外线橙色滤光片在紫外线源上拍摄凝胶。
-使用GeneTools（Syngene）或BioNumerics（Applied Maths-Biomérieux）等软件处理凝胶图像，以划定泳道和检测条带。