江瑶青毒素G认证校准溶液
江瑶青毒素（PnTXs）是一组快速作用的环状亚胺毒素，最初在亚洲贝类中发现[1-5]。随后，在澳大利亚和新西兰的贝类中检测到了许多新的PnTX类似物[6]。PnTXs由火神藻产生[7]，火神藻是一种最初在地中海分离的甲藻[8]。最近的研究表明，PnTXs在挪威[9]和加拿大[10]的贝类中广泛存在，其中PnTX-G是流行的类似物。CRM-PnTX-G是经认证的PnTX-G在甲醇（含0.01%乙酸）中的校准溶液，浓度为2.77µmol/L。
Pinnatoxin-G 江瑶青毒素G
CAS registry No.: 1312711-74-2 CAS注册号：1312711-74-2
Molecular formula: C42H63NO7 分子式：C42H63NO7
Molecular weight: 693.95 分子量：693.95
[M+H]+: m/z 694.4677 [M+H]+：M/z 694.4677
预期用途
加拿大NRC江瑶青毒素G认证校准溶液标准品CRM-PnTX-G是一种经过认证的校准溶液，旨在开发分析方法和准确定量PnTX-G。CRM-PnTX-G的浓度使其适合于制备用于校准液相色谱（LC）和液相色谱-质谱（LC-MS）仪器的稀释系列，以及用于回收实验的贝类对照样品的加标。
储存和使用说明
为确保加拿大NRC江瑶青毒素G认证校准溶液标准品CRM-PnTX-G的稳定性，该材料应在-12°C或以下未开封的条件下储存。同样，该材料的任何稀释液都应储存在-12°C或以下的低顶空小瓶中。
打开前，应将每个安瓿加热至室温，并将内容物充分混合。安瓿应在预先刻好的标记处打开。安瓿打开后，应使用校准的容量设备取出准确的等分试样，并将其转移到容量瓶或小瓶中。如果溶液打开超过几分钟，则会因甲醇蒸发而导致浓度增加。建议CRM-PnTX-G溶液不应蒸发至干，因为玻璃表面可能会有损失。注：溶液的体积未经认证。因此，安瓿的全部内容物不应简单地转移到容量瓶中并稀释至一定体积。
CRM-PnTX-G的制备
加拿大NRC江瑶青毒素G认证校准溶液标准品CRM-PnTX-G是在新西兰Cawthron研究所从南澳大利亚收获的受自然污染的太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）中分离出来的[6]。通过1H核磁共振（NMR）证实了用于制备CRM-PnTX-G的PnTX-G的结构和纯度（图1）。LC-MS/MS产物离子光谱显示片段化，这是PnTX-G的特征（图2）。LC-MS还用于估计PnTX-G储备溶液的一般纯度（3µm Hypersil BDS C8柱，150×2.1mm；流动相由水（A）和乙腈/水（95/5）（B）组成，每个含有2mM甲酸铵和50mM甲酸（pH 2.3）；在20分钟内以200µL/min的速度从10至100%B进行梯度洗脱+20°C柱温）。未观察到主要杂质。然而，检测到一些与PnTX相关的次要杂质（[M+H]+=M/z 708）（图3）。使用等度洗脱条件，PnTX杂质相对于PnTX-G的总比例＜0.1%（柱：1.9µm Hypersil Gold C18，50×2.1 mm；如上所述的A和B溶剂；35%B，300µL/min+20°C柱温）。
通过将纯PnTX-G溶解在CD3OH中用于定量NMR来制备储备溶液。CRM溶液是通过在脱气的高纯度甲醇（含0.01%乙酸）中准确稀释储备溶液来制备的。将该溶液用Teflon搅拌棒和磁力搅拌器充分混合，同时在氩气氛下的冰浴中冷却。将等分试样分配到干净的充满氩气的琥珀色玻璃安瓿中，然后立即对其进行火焰密封。