加拿大NRC标准品CRM-GYM环亚胺毒素校准溶液有证标准物质稳定性研究
环亚胺毒素校准溶液有证标准物质
加拿大NRC标准品CRM-GYM环亚胺毒素校准溶液有证标准物质 Gymnodimines（GYM）是一组被称为环状亚胺的“速效”海洋毒素的成员[1-5]。Gymnodimine首次在新西兰的贝类和浮游生物中被观察到[1]，此后在不同的地方被观察到[6，7]。Gymnodimine由甲藻Karenia selliformis产生，并在小鼠生物测定中导致快速死亡[8]。CRM-GYM-b是GYM在含有0.05%三氟乙酸（TFA）的甲醇中的经认证的校准溶液，其浓度如表1所示。
Gymnodimine Gymnodimine
CAS registry No.: 173792-58-0 CAS号：173792-58-0
Molecular formula: C32H45NO4 分子式：C32H45NO4
Molecular weight: 507.71 分子量：507.71
[M+H]+: m/z 508.3421 [M+H]+：M/z 508.3421
预期用途
加拿大NRC标准品CRM-GYM环亚胺毒素校准溶液有证标准物质 CRM-GYM-b是一种经过认证的校准溶液，专为GYM的分析方法开发和准确定量而设计。CRM-GYM-b的浓度使其适用于制备用于校准液相色谱（LC）和液相色谱-质谱（LC-MS）仪器的稀释系列，以及用于回收实验的贝类对照样品的加标。
CRM-GYM-b的制备
GYM是在Cawthron研究所（Nelson，New Zealand）从卖方卡氏菌的实验室培养物中分离出来的。通过一系列色谱步骤对其进行纯化。CRM溶液是通过将纯GYM溶解在脱气的高纯度甲醇（含有0.05%三氟乙酸）中来制备的。将该溶液用Teflon搅拌棒和磁力搅拌器充分混合，同时在氩气氛下的冰浴中冷却。将等分试样分配到琥珀色玻璃安瓿中，并在氩气下进行火焰密封。然后对安瓿进行标记、包装，并立即转移到-80°C下长期储存。
结构确认和纯度评估
加拿大NRC标准品CRM-GYM环亚胺毒素校准溶液有证标准物质 通过1H核磁共振（NMR）证实了用于制备CRM-GYM-b的GYM的结构和纯度（图1）。LC-MS/MS产物离子光谱显示了GYM特有的碎裂现象（图2）。
使用LC-MS对GYM储备溶液进行纯度评估。虽然没有观察到主要杂质，但检测到许多GYM相关杂质（M/z 524.4处的[M+H]+）的含量非常低（<0.1%）（图3）。从GYM中分离出一种早期洗脱的未知GYM异构体，占GYM总浓度的<1%，并使用不同的等度条件通过LC-MS进行检测（图4）。
同质性
加拿大NRC标准品CRM-GYM环亚胺毒素校准溶液有证标准物质 在填充系列中选择代表性数量的安瓿（n=24），以确定CRM-GYM-b的均匀性。通过LC-MS进行分析。瓶间的变化被测量为小于一种溶液的重复分析的变化（n=24，RSD<3%），因此在整个安瓿范围内证明了可接受的均匀性。
稳定性研究
CRM-GYM-b在甲醇（0.05%TFA）中的短期稳定性使用反向等时稳定性研究设计[9]进行评估，参考温度为-80°C。在30天的时间里，在高达+37°C的温度下没有观察到GYM的降解，这表明在短期内具有良好的稳定性。在6个月后的一项长期研究中，+37°C下的降解确实变得显著。使用-12°C斜率的标准误差，确定了与长期稳定性评估相关的不确定度，以纳入CRM-GYM-b的最终组合不确定度。长期稳定性的相对不确定度（µlts）为1.14%。CRM-GYM-b的建议储存温度为-12°C或更低。